共表達豬瘟病毒E0、E2基因重組雞痘病毒的遺傳穩(wěn)定性

[目的]研究共表達豬瘟病毒E0、E2基因的重組雞痘病毒rFPV-E0-E2的遺傳穩(wěn)定性.[方法] 將重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細胞上連續(xù)傳20代,取第5、10、15和20代重組病毒進行以下檢測:用藍斑試驗鑒定各代重組病毒純度;用PCR方法擴增豬瘟病毒E0、E2基因,進行基因序列分析;用間接免疫熒光實驗檢測各代重組病毒中豬瘟病毒E0、E2基因的表達.[結(jié)果] 各代次重組病毒產(chǎn)生的蝕斑均為藍色,表明病毒純度穩(wěn)定.從各代重組病毒DNA中均擴增出了約700 bp和1 200 bp的條帶,分別與E0和E2基因片段長度一致,基因序列分析發(fā)現(xiàn),第5、10、15代重組雞痘病毒中的E0、E2基因序列與原始轉(zhuǎn)移載體序列完全一致,第20代重組病毒插入基因有2處發(fā)生了點突變 (即E0基因139位A→G,E2基因413位A→G),其編碼的氨基酸也發(fā)生了相應變化(即E0蛋白47位Thr→Ala,E2蛋白138位Glu→Gly),但蛋白抗原表位未發(fā)生明顯的變化.間接免疫熒光實驗檢測到各代重組病毒均能正常表達目的蛋白.[結(jié)論] 重組雞痘病毒rFPV-E0-E2在雞胚成纖維細胞上傳20代以內(nèi),具有良好的遺傳穩(wěn)定性,插入的豬瘟病毒E0、E2基因能夠正確穩(wěn)定表達.

作 者： 張浩 郭抗抗 張彥明 王養(yǎng)會 尹寶英 孫裴 王文秀 何雷   作者單位： 西北農(nóng)林科技大學,動物醫(yī)學院,陜西,楊凌,712100  刊 名： 西北農(nóng)林科技大學學報(自然科學版)  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF NORTHWEST A&F UNIVERSITY(NATURAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2008 36(8)  分類號： S852.65+1  關鍵詞： 豬瘟病毒   重組雞痘病毒   遺傳穩(wěn)定性  

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