HCMV截短UL83基因真核表達重組體的構(gòu)建、轉(zhuǎn)染及其免疫效力研究

為了構(gòu)建人巨細胞病毒(HCMV)截短UL83基因真核表達重組體,實現(xiàn)其在Hep-2細胞中的穩(wěn)定表達,研究該截短UL83基因真核表達重組體免疫效力,采用基因重組的方法,將HCMV AD169株截短UL83基因定向克隆到帶有綠色熒光蛋白(GFP)作為報告基因的真核表達載體pEGFP-C1上,構(gòu)建真核重組表達質(zhì)粒pEGFP-C1-UL83;脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染至Hep-2細胞中,G418篩選獲得穩(wěn)定表達pp65細胞表達系.經(jīng)基因測序顯示,重組體中截短UL83基因完全正確,RT-PCR和Western blot檢測證實其可在Hep-2細胞中穩(wěn)定表達.用該重組體和其表達產(chǎn)物在HCMV先天性感染小鼠模型上進行免疫保護試驗顯示,母鼠血清可檢測到特異性抗HCMV pp65抗體,效價為:1∶2.51～1∶50.79;子鼠腦組織內(nèi)未分離出病毒,亦未檢測出病毒pp65蛋白抗原表達.初步結(jié)果表明,pEGFP-C1-UL83具有較好的免疫原性,可作為DNA疫苗刺激機體產(chǎn)生有效抗體,并具有阻止病毒垂直傳播的保護性作用.

作 者： 高榮保 李艷秋 王明麗 GAO Rong-bao LI Yan-qiu WANG Ming-li   作者單位： 安徽醫(yī)科大學基礎(chǔ)醫(yī)學院微生物學教研室,合肥,230032  刊 名： 微生物學報  ISTIC PKU 英文刊名： ACTA MICROBIOLOGICA SINICA  年，卷(期)： 2006 46(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： HCMV截短UL83基因   綠色熒光蛋白   轉(zhuǎn)染   Hep-2細胞   DNA疫苗  

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