重組菌轉(zhuǎn)化4-氯乙酰乙酸乙酯為R-(+)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的研究

通過醛基還原酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶的基因構(gòu)建重組大腸桿菌,并考察加入誘導(dǎo)劑的時間、濃度和誘導(dǎo)時間對酶活的影響,優(yōu)化重組大腸桿菌的表達(dá).實驗結(jié)果表明,重組大腸桿菌在對數(shù)生長中期加入0.4 mmol/L的誘導(dǎo)劑,在32 ℃下培養(yǎng)8 h,酶活可達(dá)到5.27 U/mg-protein.以重組大腸桿菌為催化劑,研究4-氯乙酰乙酸乙酯轉(zhuǎn)化為R-(+)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯的反應(yīng),發(fā)現(xiàn)利用基因重組技術(shù)構(gòu)建的大腸桿菌,可使醛基還原酶和葡萄糖脫氫酶共同表達(dá),實現(xiàn)輔酶再生,提高產(chǎn)物對映體過量值.在轉(zhuǎn)化反應(yīng)過程中,隨著溫度升高,產(chǎn)物收率先增加;當(dāng)轉(zhuǎn)化溫度在32 ℃以上,收率反而會下降.底物對反應(yīng)有抑制作用,采用分批加入底物的方式可以減少抑制作用,提高產(chǎn)物收率.

作 者： 李靜 林建平 徐志南 譚天偉 岑沛霖 Li Jing Lin Jianping Xu Zhinan Tan Tianwei Cen Peilin   作者單位： 李靜,林建平,徐志南,岑沛霖,Li Jing,Lin Jianping,Xu Zhinan,Cen Peilin(浙江大學(xué)材料與化學(xué)工程學(xué)院,浙江,杭州,310027)

譚天偉,Tan Tianwei(北京化工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,北京,100029) 

刊 名： 化學(xué)反應(yīng)工程與工藝  ISTIC PKU 英文刊名： CHEMICAL REACTION ENGINEERING AND TECHNOLOGY  年，卷(期)： 2006 22(4)  分類號： Q781 Q554 Q643  關(guān)鍵詞： 不對稱還原   4-氯乙酰乙酸乙酯   R-(+)-4-氯-3-羥基丁酸乙酯  

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