一種通用高效的復雜載體構建的新方法

文章報道了一種簡便、通用、高效的復雜載體構建方法.此法是在PCR引物設計時,在目的片段5′端加上隨機設計的接頭,利用PCR克隆目的片段,再用T4 DNA聚合酶3′→5′外切酶活性處理PCR克隆目的片段,產生多個首尾相匹配的黏性末端,進行多片段定向連接、轉化、重組子鑒定.以7片段拼接的水稻單交換質體定點整合表達載體pRSMGA的構建為例,應用上述方法構建只需做兩次連接、轉化,且其重組、轉化效率高.數(shù)10次實驗證明:這是一種簡便、通用、高效的復雜構建載體的方法,該法至今尚未見報道.

作 者： 陸云華 馬立新 蔣思婧 LU Yun-Hua MA Li-Xin JIANG Si-Jing   作者單位： 陸云華,LU Yun-Hua(湖北大學生命科學院分子微生物與基因工程實驗室,武漢,430062;宜春學院生物工程系,江西,宜春,336000)

馬立新,蔣思婧,MA Li-Xin,JIANG Si-Jing(湖北大學生命科學院分子微生物與基因工程實驗室,武漢,430062) 

刊 名： 遺傳  ISTIC PKU 英文刊名： HEREDITAS(BEIJING)  年，卷(期)： 2006 28(2)  分類號： Q78  關鍵詞： 復雜載體構建   新方法   T4   DNA聚合酶   水稻  

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