大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子基因T載體的構(gòu)建及鑒定

目的:探討利用T載體完成大鼠腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)產(chǎn)物克隆的可行性.方法:提取大鼠腦組織總RNA,利用M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶及oligo-dT引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA第一條鏈,再利用exTaq酶及BDNF上、下游引物擴增出BDNF cDNA,最后利用Buffer Ⅰ連接液將BDNF基因克隆入T載體用于測序及下一步克隆.結(jié)果:成功構(gòu)建了BDNF基因T載體,經(jīng)雙脫氧鏈終止法測序證實為大鼠BDNF基因.結(jié)論:利用T載體克隆BDNF基因PCR產(chǎn)物簡便、快捷,成功率高.

作 者： 吳燕峰 王鵬 唐勇 黃霖 楊睿 沈慧勇   作者單位： 吳燕峰(中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院臍血庫)

王鵬,唐勇,黃霖,楊睿,沈慧勇(中山大學(xué)附屬第二醫(yī)院骨科,中山大學(xué)脊髓損傷研究所,510120,廣州市沿江西路107號) 

刊 名： 中國脊柱脊髓雜志  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF SPINE AND SPINAL CORD  年，卷(期)： 2006 16(4)  分類號： Q786  關(guān)鍵詞： 腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子   T載體   基因克隆  

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