綿羊重組朊蛋白的原核表達與結構分析

利用DNA重組技術,將綿羊朊病毒正常成熟蛋白基因OvPrPc插入表達載體pET30a,在大腸桿菌BL21(DE3)中高效表達,獲得的表達產(chǎn)物為綿羊朊蛋白OvPrP(23～256).經(jīng)SDS-PAGE分析,表達產(chǎn)物以包涵體形式存在.將包涵體蛋白用8 mol/L尿素溶解,在變性條件下經(jīng)Ni-NTA柱親和層析純化,而鎳柱能競爭性結合含有6×His標簽的pET30a表達的目的蛋白.由于目的蛋白是在變性條件下純化的,需要將其復性后才能恢復天然構象.采用梯度尿素透析復性后,復性率為25%左右.為了進行重組朊蛋白的結構分析,將重組蛋白進行超濾濃縮,至蛋白濃度為0.4 mg/mL時,采用遠紫外線圓二色譜(CD)分析其二級結構,并對其高級結構進行了預測.結果表明:通過Western-blotting鑒定,表達的綿羊朊病毒正常成熟蛋白OvPrP(23～256)的分子量為25172.80 u左右.經(jīng)過Jascow32軟件分析后,測得OvPrP(23～256)的二級結構含量為:α螺旋為39.4%,β折疊為0%,轉角為0%,無規(guī)卷曲為60.6%.綿羊重組朊蛋白高級結構的分析為朊病毒疾病的發(fā)生機理的探討提供科學依據(jù).

作 者： 劉美麗 趙德明 周向梅 尹小敏 LIU Mei-li ZHAO De-ming ZHOU Xiang-mei YIN Xiao-min   作者單位： 中國農(nóng)業(yè)大學,國家動物海綿狀腦病實驗室,北京,100094  刊 名： 中國預防獸醫(yī)學報  ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE  年，卷(期)： 2006 28(6)  分類號： Q78  關鍵詞： 綿羊朊病毒蛋白   原核表達   圓二色譜   結構分析  

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