重組TRX-BNP融合蛋白的構(gòu)建和表達(dá)

目的:構(gòu)建人B型鈉尿肽(BNP)表達(dá)質(zhì)粒,用pET原核表達(dá)系統(tǒng)制備重組抗原TRX-BNP融合蛋白.方法:根據(jù)GenBank中檢索到的人BNP成熟蛋白序列編碼,設(shè)計(jì)合成編碼BNP-32蛋白的DNA,并分別在5'端和3'端設(shè)計(jì)EcoR I和HindⅢ酶切位點(diǎn),經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、構(gòu)建重組質(zhì)粒pET32a.BNP,并在BL21(DE3)經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá),Ni-NTA親和層析制備TRX-BNP.通過(guò)DNA測(cè)序、融合蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量分析及Western印跡來(lái)鑒定TRX-BNP質(zhì)粒及表達(dá)的BNP抗原的正確性.結(jié)果:DNA測(cè)序結(jié)果表明,所獲得的BNP基因編碼序列符合序列設(shè)計(jì)的要求,正確插入設(shè)計(jì)位點(diǎn),重組質(zhì)粒pET32a.BNP構(gòu)建成功.IPTG誘導(dǎo)后SDS-PAGE電泳顯示有特異性蛋白TRX-BNP表達(dá),蛋白相對(duì)分子質(zhì)量21 400,Ni-NTA親和純化,在UVP凝膠成像分析系統(tǒng)上作定量分析,BNP蛋白純度達(dá)到95%.Western印跡結(jié)果證實(shí)TRX-BNP蛋白特異性表達(dá).結(jié)論:成功制備TRX-BNP融合蛋白.

作 者： 游曉華 秦永文 黃盛東 袁揚(yáng) 龔德軍   作者單位： 游曉華,秦永文(第二軍醫(yī)大學(xué)長(zhǎng)海醫(yī)院心血管內(nèi)科,上海,200433)

黃盛東,袁揚(yáng),龔德軍(長(zhǎng)海醫(yī)院胸心外科) 

刊 名： 第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)  ISTIC PKU 英文刊名： ACADEMIC JOURNAL OF SECOND MILITARY　MEDICAL UNIVERSITY  年，卷(期)： 2006 27(6)  分類(lèi)號(hào)： Q781  關(guān)鍵詞： B型鈉尿肽   融合蛋白   硫氧還蛋白  

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