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三丙二酸富勒烯對(duì)DNA限制性?xún)?nèi)切酶和Taq DNA聚合酶活性的抑制作用
采用具有HindⅢ和EcoRⅠ單一酶切位點(diǎn)的pEGFP-N1超螺旋型質(zhì)粒為底物,檢測(cè)三丙二酸富勒烯(trimalonic acid C60,TMA C60)對(duì)DNA限制性酶切反應(yīng)的作用.同時(shí)以該質(zhì)粒為模板,測(cè)定TMA C60對(duì)Taq DNA聚合酶催化的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)的影響.酶切產(chǎn)物與PCR擴(kuò)增產(chǎn)物均通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳來(lái)顯示.實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),在質(zhì)粒酶切體系或PCR體系中添加TMA C60后,酶切或擴(kuò)增產(chǎn)物的生成量均顯著減少.TMA C60的作用存在濃度依賴(lài)性,對(duì)HindⅢ,EcoRⅠ兩種酶切反應(yīng)和PCR的半抑制濃度IC50值分別為16.3,6.0,6.0 μmol/L.兩種活性氧清除劑L-抗壞血酸-2-磷酸酯鎂和疊氮化鈉在濃度為2～10 mmol/L時(shí),不能拮抗TMA C60對(duì)PCR和兩種酶切反應(yīng)的抑制作用.但是,在PCR體系中增加Taq DNA聚合酶能夠拮抗TMA C60的作用.這些結(jié)果表明,TMA C60能夠抑制上述3種DNA代謝相關(guān)酶的活性,其作用可能與活性氧無(wú)關(guān).
作 者： 楊新林 陳哲 孟憲梅 李博 譚信 作者單位： 北京理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院,北京,100081 刊 名： 科學(xué)通報(bào) ISTIC PKU 英文刊名： CHINESE SCIENCE BULLETIN 年，卷(期)： 2007 52(4) 分類(lèi)號(hào)： O6 關(guān)鍵詞： 三丙二酸富勒烯 DNA限制性?xún)?nèi)切酶 Taq DNA聚合酶 活性氧 抑制【三丙二酸富勒烯對(duì)DNA限制性?xún)?nèi)切酶和Taq DNA聚合酶活性的抑制作用】相關(guān)文章：
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